該模型通過(guò)長(zhǎng)期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時(shí)，檢測(cè)其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來(lái)確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國(guó)際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。

模型動(dòng)物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動(dòng)物房SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點(diǎn)

門(mén)采用專用凈化密閉門(mén)并配備觀察窗。單向走道呈順時(shí)針走向設(shè)計(jì)。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機(jī)房和配電室等。

（2）設(shè)計(jì)參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對(duì)濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強(qiáng)梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級(jí)；菌落數(shù)：≤3個(gè)/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動(dòng)物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時(shí)間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。空氣經(jīng)過(guò)初、中、三級(jí)過(guò)濾器后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動(dòng)物飼養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實(shí)驗(yàn)室等安裝有手動(dòng)和自動(dòng)開(kāi)關(guān)，根據(jù)實(shí)際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點(diǎn)和晚上8點(diǎn)開(kāi)啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因?yàn)镾PF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進(jìn)入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機(jī)，按照房間順序編排電話號(hào)碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機(jī)保持聯(lián)系，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外信息的及時(shí)溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的出入口、走道、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機(jī)，能夠及時(shí)了解設(shè)施的運(yùn)行狀態(tài)；也能有效督促實(shí)驗(yàn)人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間的動(dòng)物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察，減少對(duì)動(dòng)物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水以純凈水為宜。本實(shí)驗(yàn)室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報(bào)系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動(dòng)物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機(jī)房控制室安裝風(fēng)機(jī)故障警報(bào)系統(tǒng)，以便及時(shí)檢修和維護(hù)，保證設(shè)施的安全運(yùn)行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室時(shí)所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動(dòng)物交叉感染，按照不同物品的特性，進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C(jī)動(dòng)門(mén)真空滅菌器消毒。

（10）動(dòng)物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點(diǎn)。通用的不銹鋼籠具長(zhǎng)、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，配有底盤(pán)和食槽，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有充足的采食和活動(dòng)空間，同時(shí)也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時(shí)，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測(cè)一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營(yíng)養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

1. 血清尿酸水平變化

給藥后 1h，氧嗪酸鉀各劑量組的血清尿酸值都開(kāi)始升高，其中 200mg/kg、300mg/kg 以及 600mg/kg 氧嗪酸鉀劑量組與對(duì)照組比較顯著增高。造模后 2h 只有 600mg/kg 氧嗪酸鉀劑量組血清尿酸值繼續(xù)升高到( 432 ± 34) μmol/L，其它各組血清尿酸值均已下降，600mg/kg 氧嗪酸鉀劑量組血清尿酸值在藥后 4h也開(kāi)始下降到和正常對(duì)照組一般的水平（表1）。

2. 黃嘌呤氧化酶表達(dá)變化

小鼠鼠腹腔注射 600mg/kg 劑量的氧嗪酸鉀組，肝臟組織 XDH/XOmＲNA 表達(dá)較對(duì)照組上調(diào); 同時(shí)注射 600mg / kg 劑量氧嗪酸鉀、47． 2mg / kg 和 3mg / kg 劑量的別嘌醇組，肝臟組織 XDH / XOmＲ-NA 表達(dá)較模型組 600mg / kg 劑量的氧嗪酸鉀組下調(diào)，差異不明顯，注射 47． 2mg/kg 和 Blank 組( 未做任何給藥處理的組) 與1% CMC-Na 組 XDH / XOmＲNA 相當(dāng)（表2）。

SPF級(jí) ICＲ小鼠160 只，雌雄各半，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部提供，屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)。飼養(yǎng)環(huán)境溫度 20℃ ～ 25℃ ，濕度40% ～ 70% ，自由飲水和采食。

1. 誘導(dǎo)劑準(zhǔn)備

氧嗪酸鉀，Sigma公司產(chǎn)品，純度≥97%。溶于羧甲基纖維素鈉，制備成100mg/kg、200mg/kg、300mg/kg、400mg/kg、500mg / kg 和 600mg / kg 劑量。

2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)ICＲ小鼠160只，雌雄各半，18~22g,飼養(yǎng)于屏障環(huán)境。

3. 給藥

對(duì)照組腹腔注射 1%CMC-Na，實(shí)驗(yàn)組給藥方案分別如下: 600mg / kg 劑量氧嗪酸鉀組、47.2mg/kg 劑量別嘌醇組、600mg/kg 氧嗪酸鉀 + 47.2mg/kg別嘌醇組600mg/kg 氧嗪酸鉀 + 6.3mg/kg 別嘌醇組。

4. 模型分析指標(biāo)

（1） 尿酸水平檢測(cè)

給藥后1h、2h、4h、8h 空腹割尾采血 0.4ml于1.5ml EP 管中，置于4℃ 冰箱放置1h，4℃ 、13 000r/min 離心15min，取血清，磷鎢酸法測(cè)定尿酸值。

（2） 小鼠肝臟黃嘌呤氧化酶 / 脫氫酶 (XDH / XO) mＲNA表達(dá)水平檢測(cè)

8小時(shí)后處死小鼠，取肝臟，提取RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,設(shè)計(jì)引物F:5 ＇-TGATGCAAGCTGGTGGTG-3＇;R:5＇-GCCACTGAGGTCAGTTCAAGGA-3＇實(shí)時(shí)熒光定量法檢測(cè): 首先將小鼠肝臟 c DNA 以 10為稀釋因子，做 5 個(gè)梯度稀釋，然后分別做 XDH/XO 基因及 GAPDH 基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的擴(kuò)增效率對(duì)基因的表達(dá)效率進(jìn)行檢測(cè)。具體操作方法如下: 分別加 XDH/XO 基因及 GAPDH 基因上、下游引物各 1μL( 10p) ，再分別加 SYBＲ Premix Ex Taq II ( Tli ＲNase H Plus) 12．5μL 及滅菌去離子水 9． 5μL、c DNA 1μL，總體積 25μL，實(shí)時(shí)熒光定量 PCＲ 設(shè)無(wú)模板對(duì)照反應(yīng)條件為: 94℃ 預(yù)變性 30s，94℃變性 5s、59℃ 退火 30s、40 個(gè)循環(huán)，其中 59℃ 到 94℃ 每 5s 采集一次熒光。反應(yīng)完成后根據(jù)熒光信號(hào)的數(shù)據(jù)，使用 CFXManager軟件計(jì)算出 XDH/XO mＲNA 表達(dá)的差異。

尿酸是嘌呤在人體中代謝的最終產(chǎn)物，主要通過(guò)黃嘌呤脫氫酶/氧化酶（XDH / XO）在肝臟中產(chǎn)生，并通過(guò)腎臟排泄。高尿酸血癥（HUA）的特征是血液中尿酸水平升高。痛風(fēng)是一種由于細(xì)胞外尿酸鹽過(guò)飽和而在關(guān)節(jié)和其他組織中沉積尿酸鈉鹽晶體而引起的疾病。 HUA定義為血液中飽和的血清尿酸鹽濃度（>7.0 mg / dl，等于416.5 μmol / l）。痛風(fēng)和HUA在人類中的發(fā)病率近來(lái)一直在增加。HUA也與高血壓和代謝綜合征的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。根據(jù)臨床報(bào)告，關(guān)鍵的病因是尿酸，不僅與痛風(fēng)的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)，而且與心血管疾病，腎結(jié)石，糖尿病，肥胖和血脂異常的風(fēng)險(xiǎn)增加有關(guān)。

黃嘌呤氧化酶主要存在于肝臟和腸道中，可將次黃嘌呤氧化成黃嘌呤，黃嘌呤氧化成尿酸。尿酸是嘌呤代謝的副產(chǎn)物，正常情況下，尿酸由腎臟排泄; 然而，如果由于尿酸過(guò)量或腎功能不全而未能通過(guò)泌尿系統(tǒng)完全清除，過(guò)量的尿酸會(huì)結(jié)晶沉積在關(guān)節(jié)和腎臟中，導(dǎo)致痛風(fēng)的發(fā)展，痛風(fēng)是世界范圍內(nèi)常見(jiàn)的疾病。由于嚙齒類動(dòng)物體內(nèi)有尿酸酶，尿酸酶能夠催化尿酸氧化生成尿囊素、過(guò)氧化氫和二氧化碳，所以，對(duì)于高尿酸血癥嚙齒類動(dòng)物模型，抑制尿酸酶活性是造模的關(guān)鍵。氧嗪酸鉀是一種競(jìng)爭(zhēng)性尿酸酶抑制劑，可阻斷肝臟尿酸酶的作用，并在嚙齒類動(dòng)物中產(chǎn)生尿酸，氧嗪酸鉀是合適的造模用藥。